3. 固相法合成环肽
固相法能够有效地避免环合过程中二聚、多聚等副反应的发生。早在60年代，Fridkin等就应用高分子载体来合成环肽[75]。线性多肽的C端羧基与树脂形成酯键而将线性肽挂在树脂上，脱去N端保护基后，以三乙胺中和，室温12小时后得到60%~80%收率的环肽，具体过程如下：
近年来发展起来的通过氨基酸侧链与树脂连接合成环肽的策略在环肽合成中应用广泛[76]。对具有天冬氨酸或谷氨酸残基的线性多肽，可选择这两个酸性氨基酸残基的侧链羧基为C端，与PAC(烷氧基苄醇)或PAL(烷氧基苄胺)或其他类型树脂缩合，将线性多肽挂在树脂上。主链羧基用烯丙基保护。逐步接肽完成之后脱去N端和C端保护基，加入缩合剂得到连在树脂上的环合产物。最后用三氟醋酸：茴香硫醚：b-巯基乙醇：苯甲醚混合试剂从树脂上切下环肽，同时脱去其它侧链保护基。采用这种策略完成了Cyclo(Ala-Ala-Arg-D-Phe-Pro-Glu-asp-Asn-Tyr-glu)的合成，收率为71%[77]。这种方法的局限性在于线性多肽前体中必需包含天冬氨酸或天冬酰氨，谷氨酸或谷氨酰胺[78-80]。
对-硝基苯基甲酮肟聚合物最早被DeGrado和Kaiser作为固相载体用于多肽的固相合成[83]。肽基肟酯在酸性条件下稳定，但在氨解的条件下很不稳定。利用肟酯能够氨解的特点，Ospay等在合成环十肽Tyrocidine A（TA）[84]时应用此法在肟树脂上合成直链的十肽，N端经TFA脱去Boc基后用DIEA中和，使氨基游离，室温搅拌24小时后，得到侧链保护的环肽，脱去保护基，纯化，得到收率高达55%的TA。
4. 酶法合成环肽：
在缓冲液中利用蛋白酶合成环肽也是正在发展的方法之一。Jackson[85]等报道了以线性多肽酯的衍生物为底物，通过酶催化成环的方法合成了几个包含12~25个氨基酸残基头尾相接的环肽，环化用的酶Subtiligase是枯草杆菌蛋白酶突变的产物，催化反应体系为pH=8的缓冲溶液。用HPLC检测，收率在30%~80%之间。环化效率与肽的序列和长度有关。利用Subtiligase合成环肽所需的线性肽的最小长度是12个氨基酸残基，低于此数将得到水解产物或线性肽二聚产物。可能是因为低于12个残基的肽底物形成的头尾相接的空间构象不能与酶的活性中心匹配。
5. 合成环肽的其它方法
下面介绍几种比较特殊的环肽合成方法：
Meuterman[86-87]等人巧妙地将光敏感辅助剂融合在环肽合成过程中，这种与常规合成方法不同的策略，不仅丰富了环肽合成方法学的内容，也为其他合成工作者提供了想象空间。直链五肽H-Ala-Phe-Leu -Pro-Ala-OH H-Ala-Phe-Leu-Pro-D-Ala-OH和H- Phe- Leu -Pro-Ala -Ala-OH在常规条件下，溶于DMF，使成为10-3~10-4 M溶液，加入3倍量Bop为缩合剂，5倍量DIEA作为碱和催化剂，未得到单体环合化合物，只得到了环二聚体和环三聚体。采用光敏辅助剂的方法，将5-硝基-2-羟基苄基和6-硝基-2-羟基苄基以及巯基乙基等光敏结构引入线性肽N端，这些结构中的羟基或巯基与C端羧基成酯后，使得N端与C端在空间位置上更为接近，经酰基转移使环缩小而得到N端连有光敏辅助剂的环肽，最后经光解反应脱去光敏辅助剂，得到首尾相连的环五肽，收率为20%，以Cyclo(Ala-Phe-Leu-Pro-Ala)的合成为例，具体过程如下：
在传统的环肽合成方法中，不仅线性肽前体的氨基酸侧链一般都需要保护，而且要求反应物在溶液中呈高度稀释状态，非保护的氨基酸的环合无论是在概念上还是在机理上都不同于传统环合方法，主要特征是（1）酰胺键在没有活化剂存在下，通过分子内酰基转移而形成；（2）两个反应端基在缓冲液中的可逆反应造成环-链的结构互变，调节和控制环的形成。这种非保护环肽的合成方法避免了烦琐的保护和脱保护步骤以及反应液高度稀释的要求，终产物可直接用于生物活性实验。
